小鹅瘟是一种侵害雏鹅和番鸭的高度接触传染性疾病,严重影响着养鹅业的发展。实践证明,应用小鹅瘟蛋黄抗体紧急免疫是一种非常有效的控制方法。但是,当前市场上充斥着大量非法的粗制蛋黄抗体,产品质量参差不齐,存在较大风险。因此,临床上需要一种更安全、高效、稳定的小鹅瘟蛋黄抗体产品。 普莱柯公司经过长期研究,筛选并获得保护谱广的毒株,优化确定了制备高免蛋源的免疫程序,联合应用高效的SAB提取技术和混合模式层析纯化技术,运用了先进的PC灭活技术,从而获得高纯度、高回收率的蛋黄抗体。该产品效价高,可达1∶16及以上;注射方便,应激小,吸收充分无残留,安全性好;易保存,2~8℃可保存24个月。临床应用证明该产品效果好,安全程度高。 1、小鹅瘟及其危害 小鹅瘟,也称鹅细小病毒感染,是一种侵害雏鹅和番鸭的高度接触性传染病。根据感染雏鹅日龄的不同,该病可表现为急性、亚急性或慢性型。10日龄以内的雏鹅最易感,2~3天内即可传遍全群,发病率及死亡率均可达100%。1956年,中国首次详细描述了雏鹅发生一种严重的疾病,1981年方定一和王永坤报道该病是由细小病毒引起的,郑玉美等后来证实了这一结果。随后,欧洲主要养鹅和番鸭的国家均报道了本病。 在中国,养鹅作为农村经济的来源之一,而且鹅毛作为加工服装和床上用品的原料,小鹅瘟造成的损失具有更深的社会影响。因此,搞好小鹅瘟的防治工作是当务之急。由于雏鹅免疫功能未完全发育成熟,弱毒疫苗免疫难以达到理想效果;同时种鹅接种疫苗后易引起产蛋下降,且种鹅个体差异以及饲养管理等因素导致母源抗体参差不齐。 实践证明,小鹅瘟抗血清或卵黄抗体对于该病紧急治疗或预防具有良好效果。 2、蛋黄抗体的特点及优势 欧洲替代方法验证中心(ECVAM)建议以蛋黄抗体(Egg Yolk Immunoglobulin,IgY)代替哺乳动物IgG作为试验和生产的抗体,不仅因为IgY 的结构与IgG相似,而且IgY在许多功能方面优于IgG。当用特定的抗原多次刺激母鸡时,鸡体内会产生大量的特异性抗体,当这些抗体流经卵巢时,在卵巢受体的介导作用下,抗体会选择性地转移到成熟卵泡中,最终积累在卵黄中。由于卵黄中的抗体量明显高于血清抗体,我们就可以利用生物化学技术从卵黄中提取出抗体。 IgY是卵黄中唯一的免疫球蛋白,具有特异性和针对性,制备周期短、易收获、成本低、产量高、无毒副作用、化学性质稳定等优势。IgY的另外一个突出优点是所谓的进化距离,由于发育的进化距离导致哺乳动物和鸡存在抗体特异性的差异。鸡产生的抗体相比于系统发育高度保守的哺乳动物产生的抗体在对抗蛋白质和肽方面往往更有效。 目前蛋黄抗体以其独特的优势,已经在鸭病毒性肝炎、鸡传染性法氏囊病、鸭疫里氏杆菌病等多种急性的危害较大的动物疾病预防治疗中发挥了显著的作用。 3、小鹅瘟精制蛋黄抗体的产品特点及优势 目前市场上的蛋黄抗体鱼龙混杂、质量也是参差不齐。临床上需要一种更加安全、高效、稳定的蛋黄抗体产品。 普莱柯公司经过长期研究探索出一套小鹅瘟蛋黄抗体工业化生产的成熟工艺。通过筛选毒株与优化免疫程序获得了高效价的高免蛋,采用先进的SAB提取技术获得了高纯度、高收率、高效价的蛋黄抗体,再通过安全的PC灭活技术,彻底清除蛋源病原微生物,有力保证了产品安全性。 3.1 免疫程序的优化 蛋鸡免疫是蛋黄抗体生产的关键。普莱柯公司分离并培育了免疫原性优良的生产用毒种——HN株,通过多次试验确定了配苗用佐剂、接种途径、接种剂量、免疫程序、采蛋时间等关键参数,从而实现了为大生产提供效价高且稳定的高免蛋源。 3.2 抗体的分离提取 IgY抗体作为一种水溶性蛋白广泛存在于卵黄脂质中,不容易被分离。 普莱柯公司试验了多种提取卵黄蛋白的方法,如有机物沉淀法(聚乙二醇、硫酸葡聚糖)、有机溶剂抽提法(用氯仿)、天然胶法、中链脂肪酸法(辛酸)、表面活性剂法、水稀释法等。经过应用提取方法的独立试验、组合试验研究,最终确定了多种方法联合使用的抗体提取法——SAB法。 SAB方法有如下几个优点: (1)有效去除脂类; (2)提取的IgY纯度高; (3)总抗体回收率高; (4)操作简单,易于大规模化生产。 3.3 抗体的灭活 由于鸡蛋可能存在垂直传播的病原以及蛋壳表面常污染一些细菌,所以研究出一种可控的灭活工艺至关重要。通过将物理灭活、化学灭活和超滤法联合使用,有效地解决了蛋黄抗体的安全性问题。通过多重作用,将潜在的蛋源病原微生物(细菌、病毒)彻底清除,同时起到除盐浓缩的效果,而且不影响抗体本身的活性。 3.4 抗体的精制 经过上述工艺,所制备的抗体已经具备相当的纯度。但由于制品中仍含有少量盐类和其它杂蛋白,为获得更高纯度的IgY,又采用了先进的混合模式层析技术,该技术是一种新型生化分离技术,疏水静电诱导层析的配基同时含有疏水基团和离子交换基团,兼具疏水作用和静电相互作用,通过静电相吸来强化吸附或静电排斥来协助解吸附,而且具有典型的耐盐吸附特性,不需要调节原料液的离子强度直接层析分离,减少分离步骤,提高分离效率。减少了操作步骤,可使抗体纯度达到99%以上,同时可获得效价在1∶16以上的抗体终产品。 4、小鹅瘟精制蛋黄抗体的临床应用效果及注意事项 4.1 临床应用 4.1.1 起效快、被动保护期长 病毒病往往在短时间内造成大量损失,这就要求治疗药物能快速起效,所以抗体的时效性和半衰期就显得尤为重要。 研究发现5日龄以内雏鹅注射小鹅瘟精制蛋黄抗体6小时后血清抗体效价就显著升高,表明注射外源抗体能够快速进入血液。根据文献介绍,当雏鹅血清小鹅瘟抗体琼扩试验检测为阳性,即可有效抵御强毒的攻击,我们通过蛋黄抗体在1日龄、5日龄、10日龄雏鹅体内的抗体消长规律研究发现,蛋黄抗体在注射后6日内雏鹅血清抗体阳转率均为100%,注射后7~10日阳转率为30%~90%,抗体水平虽有所下降,但对小鹅瘟病毒仍有较强的抵抗力。(见图1、图2、图3) 4.1.2 保护效果好 河南平顶山宝丰某养殖场3852羽皖西白鹅,7日龄时部分发病,表现缩脖,站立不稳,离群喜卧,死亡144只。剖检大部分病死雏鹅肝脏有出血点,小肠中后段膨大增粗,有凝固性栓子;部分雏鹅肠壁变薄,胆囊明显膨大,心肌颜色变淡。采集病料在实验室经PCR鉴定为小鹅瘟病毒感染,立即对鹅群注射小鹅瘟精制蛋黄抗体,1.5ml/只。结果注射抗体2天后雏鹅明显好转,4天后停止死亡,应用抗体期间共死亡雏鹅193只,治愈率达95%。 4.2 注意事项 4.2.1 使用应尽早,通常在疾病的潜伏期和前驱期的初期治疗效果显著。 4.2.2 不与疫苗同期接种,一般注射抗体后7日内不应使用疫苗,且接种疫苗后5日内避免使用抗体。 4.2.3 注射效果最佳,饮水效果不显著。